تعرف على الأجهزة الكيميائية....بالصور!!!

مشاركة : 15

dody06

جامعـي اســتثنائي

ّ*Optimistic*ّ

مسجل منذ: 10-11-2008
عدد المشاركات: 918
تقييمات العضو: 0
المتابعون: 22

غير موجود
اشــترك بالتحديثات
رسالة مستعجلة

رد مشاركة : تعرف على الأجهزة الكيميائية....بالصور!!!

09-09-2009 10:37 PM

السلام عليكم

نكـمل....

رحلان كهربائي شعري - Capillary Electrophoresis

أود أن أضيف بعض المعلومات عن هذا الجهاز.....

الرحلان الكهربائي Electrophoresis

الرحلان الكهربائي , تعريفه , الجهاز وأقسامه , طريقة العمل : تعريفه :
هو انتقال جزيئات عضوية متشردة بسرعة معينة تحت تأثير حقل كهربائي ، يتم فصلها بالاعتماد على الاختلاف في سرعة انتقال الجزيئات .
يتألف الرحلان الكهربائي من نوعين :
1.الرحلان الكهربائي بالطور السائل أو الحدودي
2.الرحلان الكهربائي بالمناطق
سنتحدث عن الرحلان الكهربائي بالمناطق
الرحلان الكهربائي بالمناطق :
تجري هجرة الجزيئات المتشردة في هذه الطريقة ضمن محلول ناقل للتيار الكهربائي و محمول على حامل ، حيث يوضع المحلول المراد تحليله على شكل بقعة أو طبقة رقيقة فوق نقطة معينة من الحامل وعند انتهاء العمل نلاحظ أن كل مكون من مكونات المزيج قد هاجر مسافة تابعة لسرعة انتقاله وشكل منقطة خاصة به مثبتة بوساطة الحامل ، وبقدر ما تكون هجرة مكونات المزيج مختلفة و متباينة يكون الفصل جيداً .
الجهاز وأقسامه :

1.حوض الرحلان : وعاء مزود بغطاء ، ويقسم على قسمين يوضع بداخلهما المحلول الناقل للتيار . يتصل كل قسم بقطب من أقطاب المولد ، يغطس في كل قسم طرفاً من أطراف الحاملSupport Media .

2.المولد : يتصل المولد بقطبين أحدهما سالب والآخر موجب ، يجب أن يعطي تيار مستمر مع فرق كمون يتراوح من 10 Volt فولت إلى عدة مئات من الفولتات . ومع شدة تيار تتراوح بين 1-30 mA ميلي أمبير .

عندما يطبق الحقل الكهربائي تهاجر الشحنات السالبة إلى المسرى الموجب ، بينما تهاجر الأجزاء المشحونة إيجابياً باتجاه المسرى السالب .
تحتوي البروتينات على كل من الوظيفة الكربوكسيلية ( حمض أسبارتيك ، حمض الغلوتاميك ) ، والتي تتخلى عن البروتون لتشكل شحنة سالبة .
أما الوظيفة الأمينية ( حمض الليزين ، حمض الأرجنين ) التي تتقبل بروتون تشكل شحنة موجبة .
تعتمد الشحنة الجزيئية للبروتين على : محتواه من الحموض الأمينية ، محتواه من الوظائف الاستبدالية مثل الكربوهيدرات ، PH المحلول الوقائي .
إن جهة هجرة البروتين تعتمد على PH المحلول الوقائي المستعمل ، تحدد نقطة التعادل الكهربائي للبروتين عند PH معينة عندما يكون المجموع الجبري للشحنات السالبة والموجبة في البروتين صفر ليصبح البروتين عديم الشحنة الجزيئية ولن يهاجر في الحقل الكهربائي .
في PH أقل من نقطة التعادل الكهربائي يملك البروتين شحنة موجبة ليهاجر إلى المسرى السالب أما في PH أقل من نقطة التعادل الكهربائي يملك البروتين شحنة سالبة ليهاجر إلى المسرى الموجب العوامل الأخرى المؤثرة في هجرة البروتينات هي حجم وشكل الجزيئة ، قوة الحقل الكهربائي ، درجة الحرارة والانتشار .
إن اختيار المحلول يؤثر بشكل كبير على هجرة الجزيئات ، فالوقاء يحدد PH الوسط والذي يحدد شحنة البروتين . وهذا ما يؤثر على السرعة واتجاه الحركة . كما تؤثر القوة الشاردية على معدل هجرة البروتين .
فزيادة القوة الشاردية تزيد من التبادل الشاردي بين المجموعات المشحونة من البروتين المعرضة لشوارد الوقاء . مما يؤثر في تبطيء معدل الحركة في الوسط الحامل ، لكنه يؤدي إلى عصابات حادة .

الأوساط الحاملة :
يمكن تقسيم العديد من الأوساط الحاملة المستخدمة في الرحلان البروتيني إلى :
1.خلات السيللوز ، هلامة الأغار ، الورق العادي . بالاعتماد على الشحنة الجزيئية .
2.بالاعتماد على كل من الشحنة والحجم هلامة النشاء Starsh-Gel ، بولي أكريلمايد PolyAcylamide .
يستخدم الآن خلات السيللوز ، و الآغار بشكل واسع في المخابر السريرية ، أما استخدام هلامة الآغاروز يتزايد شيئاً فشيئاً .
لا بد من التمييز بين الآغار الذي يحتوي على كل من الآغاروز والآغاروبكتين ، والآغاروز .
إن الآغاروبكتين AgaroPectin مادة عالية الشحنة بسبب وظائف الكربوكسيل والكبريتات مما يؤدي إلى الانتقال بكهرباء الحلول الداخلي مما ينقص وضوح الرحلان الكهربائي .
أما الآغاروز فهو الشكل المنقى من الآغار .

طريقة العمل :

تم وصف الأسلوب القياسي في الرحلان الكهربائي لبروتينات الدم باستخدام هلامة الآغاروز منذ عام 1979 ، حيث يحتوي Kit الرحلان الكهربائي على هلامة ( جيل ) صناعي ، محاليل الصبغ .
تستخدم الطرق القياسية 0.5-1% من الهلام ، مع وقاء الباربيتال الصودي أو ثالثي بوريك أسيد الـ edta في درجة PH=8.6 تطبق عينة البلاسما بشكل بقعة على سطح الآغاروز ، ثم تترك لتمتص داخل الهلام . ثم يتم وصل الهلامة إلى المساري بواسطة ورقة ترشيح مشبعة بالوقاء . يتم وصل المساري إلى تيار مستمر ليمر التيار خلال الهلام ، ليفصل البروتينات . بعد 20 دقيقة تكتمل عملية الرحلان ليتم إزالة المساري ثم تغمس في محلول مثبّت ، يحتوي المحلول المثبت عادةً حمض الخل ، الذي يخرب البروتين و يمنعه من الحركة داخل الهلام . وهذا يمنع انتشار عصابات البروتين في الوسط الحامل ، يكون البروتين في هلامة الآغاروز غير ظاهر ، لذا نستخدم محاليل صباغية لإظهار العصابات مثل : أميدو بلاك Amido Black ، Coomassie Brilliant blue ، أحمر بونسو Ponceau S .
بعد عملية الصبغ ، يغمس الهلام في محلول مزيل للصبغة عادةً ( مزيج من الميتانول ، و حمض الخل الماء ) لإزالة الفائض من الصباغ ، وتشكيل عصابات بروتينية حادة ، وجعل أرضية قراءة العصابات شفافة .
يترك الهلام ليجف في قطعة بلاستيك نظيفة .
يتم فصل بروتينات البلاسما على هلامة الآغاروز القياسية إلى خمس مجموعات ( أو خمسة مناطق ) . منقول للامانة

أرجو الفائدة
تحيتي و
ســـــــــــــ ـــــــــــلام

« عرض آخر مواضيع العضو »

ملتقى طلاب جامعة دمشق

أنت غير مسجل لدينا.. يمكنك التسجيل الآن.